U radu je prikazan proces osposobljavanja računala Mac Pro (Apple Inc., SAD) za ponovnu uporabu nadogradnjom osnovnih komponenti te njegova priprema za obradu audio i video materijala. Životni ciklus ...tehničkih i elektroničkih proizvoda sve je kraći pa zbog toga raste količina EE otpada (električni i elektronički otpad) što znatno ugrožava okoliš. Prilikom analize hardvera i nadogradnji elemenata za obradu računalnih informacija, provedena su mjerenja (eng. benchmarks) čiji rezultati pokazuju da je računalo Mac Pro, bez obzira na starost, sposobno nositi se sa zahtjevnim procesima koji uključuju obradu multimedijskih materijala. Uspješnom nadogradnjom multimedijske radne stanice osposobljeno je računalo za zahtjevne radne zadatke obrade slike i zvuka. Prikazani su i pojašnjeni pojmovi recikliranja, ponovne uporabe te osnovne regulative vezane za EE otpad. Korištenjem nadograđenih računala smanjuje se proizvodnja EE otpada čime se aktivno doprinosi očuvanju okoliša.
Tijekom devedesetih godina prošloga stoljeća u Republici je Hrvatskoj
došlo do, za okoliš, vrlo nepovoljne promjene strukture
ambalaže napuštanjem povratne ambalaže te povećanjem uporabe
nepovratne ...ambalaže velikog volumena. Na razini se države
neopravdano zanemarivao problem gospodarenja ambalažnim otpadom te je izostala šira društvena i, posebice, državna podrška u
rješavanju nastalih poteškoća. Istodobno su se sve više nametali
interesi proizvođača, tj. tvrtki koje su imale vlastiti profitni interes u
promjeni strukture ambalaže prema nepovratnoj i voluminoznoj.
Trenutna situacija na području postupanja s ambalažnim otpadom
od PET-a za Hrvatsku je izrazito nepovoljna jer se taj otpad najvećim
dijelom odlaže na odlagališta. Obveza je svake suvremene države
na području gospodarenja otpadom organizacija sustava cjelovitoga
gospodarenja otpadom. Taj zadatak proizlazi i iz prihvaćenih
međunarodnih konvencija i smjernica. Najnovije spoznaje pokazuju
da je i u Hrvatskoj moguće na rentabilan način reciklirati PET, ako se
vodi računa o usklađivanju prihoda i troškova odvojenoga sakupljanja
i recikliranja. To je dinamičan proces koji pored ostaloga
podrazumijeva i razvoj materijalnoga recikliranja PET-a u Hrvatskoj.
U radu je dan pregled najnovijih spoznaja i trendova na području
proizvodnje plastomernih kompozita s prirodnim vlaknima.
Navedene su najvažnije prednosti i ograničenja njihove primjene,
mogućnosti ...preradbe i oporabe. Na primjeru plastomernih
kompozita s drvnim vlaknima prikazan je utjecaj recikliranja na
mehanička svojstva kompozita.
Cilj istraživanja: Prvenstveni cilj ovoga rada bila je karakterizacija konstitutivne internalizacije konformiranih i nekonformiranih MHC molekula I razreda, odnosno karakterizacija njihove ...endocitoze, recikliranja i degradacije. Poznato je da razlika u konformaciji MHC-I molekula uzrokuje njihovo razdvajanje u sekretornom putu. Stoga su u ovom radu istražena načela njihova razdvajanja tijekom endocitoze i putovanja kroz endosomalne odjeljke. Na temelju eksperimentalnih mjerenja cilj nam je bio i uspostavljanje matematičkog modela za kinetičku analizu endosomalnih putova.
Materijal i metode: Istraživanja smo proveli na mišjim fibroblastima J26 transficiranim s genom koji kodira molekule HLA-B7 (J26-B7), HLA-Cw6 (J26-Cw6) ili HLA-G1 (J26-G1), na humanoj tumorskoj staničnoj liniji HeLa koja konstitutivno izražava sve klasične HLA molekule I razreda, Balb 3T3 mišjim fibroblastima, te L-Ld stanicama (mišji fibroblasti transficirani genom za molekule H2-Ld). Za praćenje MHC molekula I razreda koristili smo monoklonska protutijela (mPt): mPt W6/32, koje prepoznaje sve klasične konformirane HLA molekule i konformirane HLA-G1 molekule, mPt HC-10, koje prepoznaje sve klasične nekonformirane HLA molekule, mPt MEM-G/1 koje prepoznaje nekonformirane molekule HLA-G1, mPt 30-5-7 koje prepoznaje konformirane H2-Ld molekule, te mPt 64-3-7 koje prepoznaje nekonformirane H2-Ld molekule. Transferinski receptor (TfR) smo pratili pomoću mPt R17, a molekule GM1 pomoću obilježene podjedinice B kolera toksina. Neionski detergent Triton X-100 nam je poslužio za ispitivanje nazočnosti molekula u lipidnim splavima. Oponašanjem uvjeta endosomalnog pH izvan stanice, utvrdili smo promjenu konformacije MHC molekula I razreda u zadanim uvjetima. Kako bismo utvrdili koji putovi su uključeni u endocitozu, endosomalno putovanje, recikliranje i degradaciju ovih molekula, koristili smo različite kemijske inhibitore. Kinetiku internalizacije pratili smo protočnom citometrijom, a unutarstanično putovanje konfokalnom mikroskopijom koristeći princip površinskog vezivanja odgovarajućeg monoklonskog protutijela i njegovog praćenja nakon određene kinetike internalizacije. Internalizirane molekule kolokalizirali smo međusobno, te s određenim endosomalnim markerima. Recikliranje molekula pratili smo modificirajući tri različita protokola iz literature i to protočnom citometrijom i konfokalnom mikroskopijom. U cilju praćenja kinetike degradacije koristili smo metodu površinske biotinilacije, te imunoprecipitacije, elektroforeze na poliakrilamidnim gelovima (SDS-PAGE), Western-blota i kemiluminiscencije. Za matematičko modeliranje i simulacije endocitoznih procesa koristili smo programski paket Mathematica (Wolfram Research Europe Ltd.). Rezultati: Konformirane MHC-I molekule dobro su izražene na staničnoj površini za razliku od nekonformiranih molekula. Djelovanjem kiselog pH (fiziološke i nefiziološke vrijednosti) izražaj konformiranih MHC-I molekula pada, dok izražaj nekonformiranih raste. Različite konformacije MHC-I molekula u ustaljenom stanju samo djelomično se kolokaliziraju unutar stanice i to prvenstveno u ranim endosomalnim odjeljcima. Niti jedan od ispitivanih kemijskih inhibitora (klorpromazin, Dynasore, filipin i AlF4-) nije blokirao internalizaciju MHC-I molekula. Nekonformirane MHC-I molekule se znatno brže internaliziraju i degradiraju od konformiranih MHC-I molekula što je najvjerojatnije posljedica činjenice da se konformirane MHC-I molekule usmjeravaju u reciklirajuće odjeljke, a nekonformirane MHC-I molekule u degradacijski put. Tome u prilog govori rezultat da se konformirane MHC-I molekule nakon internalizacije nalaze prvenstveno u jukstanuklearnom području zajedno s Tf/TfR i Rab11 GTPazom, dobro poznatim biljezima jukstanuklearnih reciklirajućih endosoma. Internalizirane konformirane MHC-I recikliraju s učinkovitošću od oko 30%, znatno manje od TfR/Tf koji recikliraju s učinkovitošću od 85-99%, što ukazuje da konformirane MHC-I molekule ulaze u zasebne reciklirajuće odjeljke. Ubrzo nakon internalizacije konformirane i nekonformirane MHC-I se kolokaliziraju s biljegom ranih endosoma (EEA-1), kao i međusobno, ali nedugo zatim stupanj kolokalizacije se smanjuje što znači da se razmjerno brzo razdvajaju. To razdvajanje blokira LY294002 (blokator PI3K), kao i konkanamicin A (blokator endosomalne H+ crpke). Djelovanjem Tx-ispiru se konformirane MHC-I molekula i TfR sa staničnih membrana, dok se nekonformirane MHC-I molekule i GM1 ne ispiru. Matematičkim modeliranjem potvrđeni su eksperimentalni rezultati, te izračunati slijedeći parametri: stopa endocitoze, stopa recikliranja i stopa degradacije.
Zaključak: Konformirane MHC-I molekule kao i TfR nalaze se u detergent-osjetljivim membranskim mikrodomenama za razliku od nekonformiranih MHC-I molekula i GM1, kako na staničnoj površini tako i u unutrašnjosti stanice. Internalizacija MHC-I molekula nije ovisna o klatrinu i dinaminu, već najvjerojatnije o funkciji malih GTPaza (Cdc42 i Arf6). Sortiranje, odnosno odvajanje endosomalnih putova konformiranih i nekonformiranih MHC-I molekula odvija se na razini ranih endosoma i ovisno je o pH. Nakon sortiranja konformirane MHC-I molekule se prvenstveno usmjeravaju u recikliranje, a nekonformirane u degradaciju.
Objectives: The aim of this study was to characterize constitutive internalization of conformed and non-conformed MHC class I molecules, with respect to their endocytosis, recycling and degradation. Conformational difference is known to segregate MHC-I molecules in secretory pathway. Therefore, we investigated endocytic pathway and putative segregation principles of these molecules during endocytic trafficking. Additionally, based on experimental measurements our goal was to establish a mathematical model for kinetics analysis of endosomal transport.
Material and methods: Experiments were performed on murine fibroblasts J26 transfected with HLA-B7 (J26-B7), HLA-Cw6 (J26-Cw6) or HLA-G1 molecules (J26-G1), on human HeLa cell line that constitutively expresses all classical HLA class I molecules, Balb 3T3 murine fibroblasts, and murine L cells stably transfected with Ld molecules (L-Ld). In order to follow MHC class I molecules, we used the following monoclonal antibodies (mAb): mAb W6/32 for all classical conformed HLA-I molecules and for conformed HLA-G1 molecules, mAb HC-10 for all classical non-conformed HLA-I molecules, mAb MEM-G/1 for non-conformed HLA-G1 molecules, mAb 30-5-7 for conformed H2-Ld molecules, and mAb 64-3-7 for non-conformed H2-Ld molecules. Transferrin receptor (TfR) was followed by mAb R17, and GM1 molecules with labeled cholera toxin B subunits. Non-ionic detergent Triton X-100 was used for testing the presence of molecules in lipid rafts. Conditions of endosomal pH were simulated outside the cell and the conformation changes of MHC-I molecules were under given conditions. In order to determine which pathways are involved in endocytosis, endosomal trafficking, recycling and degradation of these molecules, we used different chemical inhibitors. The kinetics of surface molecules was followed by flow citometry and their intracellular trafficking by confocal microscopy after binding of appropriate mAbs. Internalized molecules were colocalized with each other as well as with specific endosomal markers. After rearranging three different protocols from the literature we followed molecules recycling by flow citometry and confocal microscopy. In order to monitor the kinetics of degradation, we used the method of surface biotinilation and imunoprecipitation, electrophoresis on polyacrylamide gels (SDS-PAGE), Western-blot and chemiluminiscence. For mathematical modeling and simulation of endocytic processes we used a software package Mathematica (Wolfram Research Europe Ltd.). Results: Conformed MHC-I molecules are well expressed on the cell surface, unlike non-conformed molecules. Expression of conformed MHC-I molecules decreases due to treatment with acid pH (physiological and non- physiological values), while expression of non-conformed MHC-I molecules increases. Different conformations of MHC-I molecules in steady state conditions are only partially colocalized intracellular, primarily in the early endosomal compartments. Neither of the tested chemical inhibitors (chlorpromazine, Dynasore, filipin and AlF4-) did not block internalization of MHC-I molecules. Kinetics of internalization, as well as degradation of non-conformed MHC-I molecules are significantly faster than kinetics of conformed MHC-I molecules, due to fact that conformed MHC-I molecules recycle, unlike non-conformed molecules. These thesis are supported also by the finding that conformed MHC-I molecules after internalization are directed primarily in juxtanuclear region where they colocalize with Tf/TfR, and with Rab11. Internalized conformed MHC-I molecules recycle with 30% efficiency, while TfR/Tf recycling efficiency is 85-99%. Shortly after internalization conformed and non-conformed MHC-I molecules colocalize with early endosomal marker EEA-1, as well as to each other, but soon thereafter the level of colocalization decreases. This separation is blocked due to the influence of LY294002 (inhibitor of PI3K) or concanamycin A (inhibitor of endosomal H+ pump). Treatment with Tx-100 removes conformed MHC-I molecules and TfR from the cell membranes, while non-conformed MHC-I molecules and GM1 are resistant to the Tx-100 treatment. Experimental results are confirmed by mathematical modeling, by which the following parameters are also calculated: the rate of endocytosis, the rate of recycling and the rate of degradation.
Conclusion: Conformed MHC-I molecules, as well as transferrin receptor are localized in detergent-sensitive membrane micro domains, while non-conformed MHC-I molecules and GM1 are localized in detergent-resistant membrane micro domains, not only on the cell surface, but also intracellularly. Internalization of MHC-I molecules is clathrin- and dynamin-i
U radu se istražuju različite metode recikliranja ploča vlaknatica kao što su kiselinska hidroliza (uz pomoć fosforne i mravlje kiseline), toplinska hidroliza i mikrovalne metode. Reciklirani su ...uzorci ploča vlaknatica izrađenih od 100 % vlakana drva bukve te ploča vlaknatica izrađenih od 70 % vlakana drva bukve i 30 % vlakana drva crnog bora. Ploče vlaknatice takvog sastava uvelike su zastupljene na tržištu. Utjecaj metoda recikliranja na vlakna istraživan je uz pomoć uređaja kojim se određuju dimenzije vlakana na optičkim načelima. Ploče od recikliranih vlakana izrađene su u laboratorijskim uvjetima i na njima su promatrane promjene određenih fizičkih i mehaničkih svojstava. Utvrđeno je da se reciklirana vlakna dobivena mikrovalnim metodama i toplinskom hidrolizom mogu učinkovito primjenjivati u proizvodnji ploča vlaknatica. Međutim, kiselinskom hidrolizom uz dodatak fosforne kiseline u uzorcima izrađenim od 100 % bukovih vlakana udio vlakana duljih od 1,24 mm smanjuje se za oko 30 %. Ploče vlaknatice nisu se mogle proizvesti od recikliranih vlakana dobivenih kiselinskom hidrolizom. Za njihovu proizvodnju pogodna su se pokazala samo reciklirana vlakna od 100 % bukovih ploča vlaknatica srednje gustoće dobivena kiselinskom hidrolizom uz dodatak fosforne kiseline.
Ispitivali smo respiracijsku funkciju i imunološki status u 101 radnika zaposlenog na recikliranju papira. U ispitivanje je uključena i kontrolna neizložena skupina od 87 radnika za usporedbu ...učestalosti respiracijskih simptoma. Ventilacijska funkcija pluća mjerena je registriranjem krivulje maksimalnog ekspiracijskog protoka i volumena na kojoj su očitavani forsirani vitalni kapacitet, forsirani ekspiracijski volumen u prvoj sekundi te maksimalni ekspiracijski protok pri 50% i zadnjih 25% vitalnog kapaciteta (FEF50, FEF25). Alergološko ispitivanje obavljeno je u 101 radnika na recikliranju papira i 37 radnika kontrolne skupine kožnim prick testovima s alergenima papira i nekim općim alergenima te određivanjem ukupnog imunoglobulina IgE.
Značajno veća učestalost kroničnih respiracijskih simptoma zabilježena je u izloženih u usporedbi s radnicima kontrolne skupine (P<0,01). Najviša učestalost utvrđena je za kronični kašalj (36,6%), kronični iskašljaj (34,7%), kronični bronhitis (33,7%), sinusitis (31,7%), katar nosa (29,7%) i dispneju (16,8%). Profesionalna astma dijagnosticirana je u 4 (4,0%) radnika na preradi papira. Vrijednosti FEF50 i FEF25 u izloženih radnika bile su značajno niže od predviđenih normala upućujući na opstruktivne promjene lokalizirane pretežno u manjim dišnim putovima. Od 101 radnika na recikliranju papira, u 16 (15,8%) utvrđene su pozitivne kožne reakcije na alergene papira. U radnika kontrolne skupine nisu utvrđene pozitivne kožne reakcije na testirane alergene papira. Povišene vrijednosti ukupnog imunoglobulina IgE utvrđene su u 21% radnika na recikliranju papira i u 5% radnika kontrolne skupine (P<0,05).
Naši rezultati upućuju na to da izloženost onečišćenjima zraka na preradi reciklirajućeg papira može dovesti do razvoja respiracijskih simptoma te plućnih funkcionalnih i imunoloških poremećaja.
U radu se opisuje problem zagađenja otpadom osnovnih životnih ekosustava (zraka, vode i tla), što je posljedica porasta broja stanovnika i razvoja industrije, posebno kemijske. Količina otpadne tvari ...problematičnog sastava povećava se, a dugogodišnja nebriga oko rješavanja toga problema rezultira brojnim neuređenim odlagalištima koja emitiraju niz štetnih tvari u okoliš.
Provedena je klasifikacija otpada i dat je prikaz obrade i zbrinjavanja otpada postupcima koji se danas najčešće primjenjuju. Te postupke možemo svrstati prema metodama obradbe na: kemijsko-fizikalne, biološke, termičke te kontrolirano odlaganje otpada ili ostataka otpada pošto je proveden neki od navedenih postupaka.
Posebno se naglašava da obradba otpada predstavlja tehnološki proces koji također ima štetne ispuste u okoliš, pa za pojedine vrste otpada valja odabrati najprihvatljiviji postupak obradbe uz poštivanje tehničkih, ekonomskih i ekoloških uvjeta.
