Aim: The toxic effects of methotrexate, a chemotherapeutic, on the testicles is an important side effect. Methotrexate impairs spermatogenesis and fertility and causes oligospermia. In this study, we aimed to minimize the testicular toxicity, those being the side effects of methotrexate, by using the probable protective effects of α-lipoic acid, a potent antioxidant. Materials and Methods: Twenty-eight male Sprague Dawley rats that we employed in this research were separated into three groups as control (0.09% PS) (n=8), methotrexate (20 mg/kg) (n= 10), and methotrexate (20 mg/kg) + α-lipoic acid (100 mg/kg) (n= 10). We performed a histochemical analysis on the testicular tissue of rats using hematoxylin-eosin and Masson’s trichrome. We performed an immunohistochemical analysis using inducible nitric oxide synthase (iNOS) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) primer ab. Results: The histochemical evaluation revealed a significant decrease in the methotrexate-induced testicular toxicity in the α-lipoic acid-treated groups. On the other hand, TNF-α and iNOS immunostaining results were also observed to support these results. Conclusion: The treatment use of α-lipoic acid succeeded in protecting against methotrexate-induced testicular damage through an α-lipoic acid-mediated antioxidant and anti-inflammatory mechanisms. α-lipoic acid can be used in combination with methotrexate as a protector against side effects during anticancer therapy. In the present study, it was shown that α-lipoic acid can be used in combination with methotrexate as a protector against side effects during anticancer treatment. Amaç: Bir kemoterapötik ajan olan metotreksatın, testisler üzerindeki toksik etkisi önemli bir yan etkidir. Metotreksat, oligospermiye neden olup spermatogenezi ve fertiliteyi bozar. Bu çalışmada, güçlü bir antioksidan olan α-lipoik asidin olası koruyucu etkilerini kullanarak metotreksat’ın yan etkisi olan testiküler toksisiteyi en aza indirmeyi amaçladık. Gereç ve Yöntem: Araştırmada kullandığımız 28 adet erkek Sprague Dawley cinsi ratlar kontrol (0.09% SF) (n= 8), metotreksat (20 mg/kg) (n= 10) ve metotreksat (20 mg/kg) + α-lipoik asit (100 mg/kg) (n= 10) olmak üzere üç gruba ayrıldı. Ratların testis dokusunda Hematoksilen-Eozin ve Masson Trikrom boyama yöntemlerini kullanarak histokimyasal analizler yapıldı. İndüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS) ve tümör nekrozis faktörü-alfa (TNF-) primer antikoru kullanılarak immünohistokimyasal analizler yapıldı. Bulgular: Histokimyasal değerlendirmede, α-lipoik asitle tedavi edilen gruplarda metotreksat’ın neden olduğu testiküler toksisitede önemli bir azalma olduğu ortaya çıkarıldı. Öte yandan TNF-α ve iNOS immünboyama değerlendirme sonuçlarının da bu sonuçları desteklediği gözlendi. Sonuç: Tedavide α-lipoik asidin kullanımı, α-lipoik asit aracılı antioksidan ve antiinflamatuvar mekanizmalar yoluyla metotreksat’ın neden olduğu testis hasarına karşı koruma sağladı. α-lipoik asit, kanser tedavisi sırasında yan etkilere karşı koruyucu olarak metotreksat ile birlikte kullanılabilir. Mevcut çalışmada, kanser tedavisi sırasında, α-lipoik asid ve metotreksat’ın kombine kullanımı yan etkilere karşı koruyucu bir ajan şeklinde kullanılabileceği gösterilmiştir.