Apesar dos avanços técnico-científicos no campo da saúde, as doenças infecciosas continuam sendo umas das principais causas de morte em todo o mundo, sendo a resistência microbiana o principal agravante desse problema. As plantas medicinais possuem uma composição muito rica em fitoquímicos que podem ser estruturalmente otimizados e processados ​​em novos medicamentos. O objetivo desse estudo foi investigar o potencial antibacteriano do extrato e frações preparadas a partir da casca do caule e das folhas de Caryocar brasiliense Cambess, utilizando ensaios in vitro. A triagem fitoquímica de plantas foi realizada usando métodos de precipitação e coloração e a atividade antibacteriana utilizando o método de difusão em disco e microdiluição em caldo contra cepas padronizadas de Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus. Os resultados da triagem fitoquímica revelaram a presença de flavonoides, esteroides livres, triterpenóides pentacíclicos livres, saponina e alcaloides. Neste estudo, os extratos brutos e frações de C. brasiliense apresentaram efeito inibitório contra S. aureus, K. pneumomiae e P. aeruginosa com halos de inibição que variou de 7,5±1,40 a 18,3±6,06 mm, sendo S. aureus mais sensível aos testes de difusão em disco. Pela microdiluição em caldo os extratos foram mais efetivos contra K. pnuemoniae (Concentração Inibitória Mínima (CIM) = 125-1000 µg/mL) seguido de S. aureus (CIM = 250-1000 µg/mL). Os extratos foram inativos contra E. coli. Com base nos resultados, os extratos de C. brasiliense podem vir a ser agentes alternativos para o controle de infecções associadas a essas bactérias, após estudos de toxicidade e testes in vivo.