This paper presents analysis of anatomical parameters of leaves in Juglans regia half-sib lines from natural stands in Đerdap Gorge in Serbia. Thirty-five half-sib lines were examined, designated according to the number of their mother trees from R1-R35. Twenty measured and derived anatomical parameters were examined, describing stomatal and leaf blade cross-section traits. According to Hierarchical analysis of variance, variation of the majority of characters describing stomatal properties were significantly affected by effect of half-sib lines. The effect of variation between plants within half-sib lines was significant for all examined stomatal traits. However, in cross-section characters, the effect of differences between half-sib lines was significant only for thickness of spongy mesophyll (SL). The discrimination model with seven selected traits achieved 60.5% of correct allocation, while the correct allocation of the model with all 20 examined traits was 81.6%. According to the results of stepwise discriminant analysis, the most powerful trait in discrimination of these half-sib lines were stomatal aperture width/stomatal aperture length ratio (Wb/La) and stomatal aperture length/ stomata guard cell length ratio (La/LA). Presented results strongly support implementation of stomatal and cross-section leaf traits in further studies that would deal with description of variability of Juglans regia. Domaći orah ( Juglans regia L.) jednodoma je dugovječna vrsta značajna ponajprije zbog svojih jestivih plodova i tvrdog visokokvalitetnog drveta, ali i zbog široke primjene u ozelenjavanju urbanih područja, kao i u agrošumarsrtvu i uslugama ekosustava. Proučavanje varijabilnosti je vrlo značajno za očuvanje vrste i temelj za daljnju selekciju, očuvanje i poboljšanje germplazme. U radu su prikazani rezultati analize anatomskih parametara listova u linijama polusrodnika Juglans regia koji potječu iz prirodnih sastojina u Đerdapskoj klisuri u Srbiji. Domaći orah smatra se autohtonom vrstom na ovome području, i zastupljen je u mnogim fitocenozama poli i oligodominantnog tipa. Na pet lokaliteta odabrano je 35 majčinskih stabala, a iz njihovog sjemena su tijekom tri vegetacijske sezone u rasadničkim uvjetima uzgajane linije polusrodnika, označene prema brojevima majčinskih stabala od R1-R35. Ispitano je dvadeset izmjerenih i izvedenih parametara koji opisuju svojstva puči i poprečnog presjeka letka. Prema analizi varijacije poduzorka, varijacija većine osobina koje opisuju svojstva puči značajno je ovisila o učinku linija polusrodinika. Učinak varijacije biljaka unutar linija polusrodnika bio je značajan za sva ispitivana svojstva puči. Međutim, uz svojstva poprečnog presjeka plojke, učinak varijacije biljaka unutar linija polusrodnika bio je značajan samo za debljinu spužvastog tkiva (SL). Diskriminantni model sa sedam selektiranih svojstava ostvario je 60,5 % ispravne alokacije, dok je model sa svih 20 ispitanih svojstava postigao 81,6 % ispravne alokacije biljaka u odgovarajuće linije polusrodnika. Prema rezultatima kanoničke i stupnjevite diskriminantne analize, svojstva s najjačom snagom diskriminacije bili su omjer širine aperture puči/duljinu aperture puči (Wb/La) i omjera duljine aperture puči/duljine stanice zatvaračice (La/LA). Klasterska analiza je pokazala da se linije polusrodnika grupiraju u 5 klastera, među kojima dominiraju prvi (koji potječu uglavnom od majčinskih stabala na lokalitetima Štrbac i Zlatica) i drugi (koji potječu uglavnom od majčinskih stabala na lokalitetima Porečke šume i Bojana). Prikazani rezultati snažno podupiru primjenu parametara puči i poprečnog presjeka plojke u budućim studijama varijabilnosti Juglans regia .