UNI-MB - logo
UMNIK - logo
 
E-viri
  • Ekspresija i pročišćavanje ...
    Golab, Narges; Khaki, Pejvak; Harzandi, Naser; Esmaelizad, Majid; Tebianian, Majid

    Veterinarski arhiv, 07/2020, Letnik: 90, Številka: 3
    Paper

    Patogene vrste Leptospira uzrokuju zoonotsku bolest leptospirozu koja je raširena u cijelom svijetu. Cilj istraživanja bio je dokazati antigene koji potiču imunosni odgovor i mogu se primijeniti u dijagnostičkim kompletima ili za razvoj cjepiva. Vanjska proteinska membrana (OMPs) leptospira potencijalni je kandidat za tu svrhu, a gen Lipl41 je dobro očuvan među patogenim leptospirama. Ekspresija i pročišćavanje rekombinantnog proteina Lipl41 provedeno je u izolatima iz Irana. Uspoređene su sve prikupljene sekvencije proteina Lipl41 i analizirane bioinformatičkim alatom iz baze podataka NCBI. Kompletne sekvencije kodona rekombinantnog proteina Lipl41 u izolatima su optimizirane, zatim subklonirane u pET32a+ vektor i pretvorene u bakteriju Escherichia coli BL21 (DE3). Optimalna ekspresija rekombinantnog Lipl41 (47kDa) postignuta je post-indukcijski pomoću isopropyl β-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG). Zatim je pročišćena denaturacijom što je uključilo primjenu serijskih koncentracija ureje. Rekombinantni protein je potvrđen metodom western blot. Istraživanje potvrđuje mogućnost ostvarenja dostatne količine i ekspresije pročišćenog Lip141 da se može upotrijebiti za razvoj dijagnostičkih kompleta i subjediničnih cjepiva.