UNI-MB - logo
UMNIK - logo
 
E-viri
  • Identifikacija i karakteriz...
    Martini, María Carla; Berini, Francesca; Ausec, Luka; Casciello, Carmine; Vacca, Carolina; Pistorio, Mariano; Lagares, Antonio; Mandic-Mulec, Ines; Marinelli, Flavia; Del Papa, María Florencia

    Food Technology and Biotechnology, 12/2021, Letnik: 59, Številka: 4
    Paper

    Pozadina istraživanja. Posljednjih su desetljeća lakaze (p-difenol:dioksigen oksidoreduktaze; EC 1.10.3.2) privukle pažnju znanstvenika zbog raznolikosti moguće primjene u biotehnologiji i industriji. Lakaze mogu oksidirati različite organske i anorganske spojeve u biokatalizatore prikladne za biotehnološke procese. Iako se u industriji najčešće koriste lakaze iz plijesni, lakaze iz bakterija pokazale su veliki potencijal primjene jer djeluju na više raznih supstrata u različitim uvjetima. Svrha je ovoga rada bila opisati plazmidno kodiranu višebakrenu oksidazu sličnu lakazama iz bakterije Ochrobactrum sp. BF15, prethodno izolirane iz zagađenog tla. Eksperimentalni pristup. Za identifikaciju novih gena za oksidazu sličnu lakazi u bakteriji Ochrobactrum sp. BF15 koristili smo in silico profil skrivenih Markovljevih modela. Da bismo okarakterizirali lakazu, proveli smo heterolognu ekspresiju gena u bakteriji Escherichia coli, pročistili enzim i mjerili njegovu aktivnost u supstratima karakterističnim za lakazu. Rezultati i zaključci. Dobiveni profili skrivenih Markovljevih modela omogućili su identifikaciju nove oksidaze slične lakazi, koju smo nazvali Lac80. In silico analiza nove Lac80 pokazala je prisutnost triju konzerviranih domena bakrene oksidaze karakterističnih za lakaze s tri domene. Uspješno smo proveli heterolognu ekspresiju Lac80 u E. coli, čime nam je omogućeno pročišćavanje proteina za daljnju analizu aktivnosti. Od trinaest ispitanih supstrata tipičnih za lakazu, Lac80 je imao slabiju aktivnost u 2,2’-azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonskoj kiselini) (ABTS), pirokateholu, pirogalolu i vanilinskoj kiselini, te veću aktivnost u 2,6-dimetoksifenolu. Novina i znanstveni doprinos. Dobiveni rezultati pokazuju da Lac80 može imati obećavajuću primjenu u industriji. U ovom je radu prikazan značaj lakaza iz bakterija te je naglašena važnost plazmida izoliranih iz okoliša kao vrijednih izvora novih gena koji kodiraju enzime za primjenu u biotehnološkim procesima.