Afinitetna kromatografska izolacija avtoprotiteles z ▫$[beta]▫$2-glikoproteinom I
Nadu, Barbara
Reakcija med antigenom in protitelesom poteka po principu kljuè-kljuèavnica. Pri tem potekajo razliène nekovalentne interakcije med epitopom in hipervarijabilnimi regijami. Afiniteta posameznih ...protiteles za antigen je lahko moèna ali sibka. Protitelesa z moèno afiniteto lazje doloèimo, ker je energija vezi z antigenom vijsa. Sibko afinitetna protitelesa pa se slabse vezejo in jih lahko pred detekcijo izgubimo v fazi spiranja.Antifosfolipidana protitelesa (aPL) so heterogena druzina cirkulirajoèih imunoglobulinov razredaIgG, v manjsi meri tudi IgM in IgA. Predstavljajo diagnostièni kriterijza antifosfolipidni sindrom (APS), prisotna pa so tudi pri drugih imunskih motnjah. [beta]2-GPI je pomemben antigen za aPL. Anti-[beta]2-GPI doloèamo s specifiènim ELISA testom (encimsko imunski test na trdnem nosilcu). Kot antigen uporabimo izoliran èloveski [beta]2-GPI. [beta]2-glikoprotein I ([beta]2-GPI) je glikoziliran plazemski protein, sestavljen iz 326 aminokislin. Najučinkovitejsa za izolacijo je afinitetna kromatografija, vendar pa je ta postopek zamuden in zahteven. Z eno izolacijo, ki traja dva tedna dobimo samo 2-4 mg proteina. Za nadaljnje preuèevanje anti-[beta]2-GPI protiteles, ki jih lahkonato izoliramo na [beta]2-GPI koloni, pa potrebujemo najmanj 14 mg proteina. Zato je pomembno doloèiti optimalne pogoje, pod katerimi lahko [beta]2-GPI kolono veèkrat uporabimo.. Nas cilj je bil doloèiti pogoje, pod katerimi lahko s kromatografsko metodo izoliramo specifièna protitelesa proti [beta]2-GPI in doloèiti pogoje regeneracije, ki omogoèajo veèkratno uporabo kolone. Za to smo uporabili preèisèeno plazmo z imunoadsorpcijo na proteinu A (vzorec PM) oziroma vzorec, ki vsebuje imunoglobuline razreda G (IgG). Razliène volumne PMvzorca smo nanasali na [beta]2-GPI kolono in lovili posamezne frakcije. Orientacijsko smo prisotnost proteinov doloèili z UV spektrofotometrijo in kvantitativno kolorimetrièno z Bio-Rad metodo. V pozitivnih frakcijah smo natopreverili prisotnost anti-[beta]2-GPI protiteles z ELISA testom. Ugotovili smo,da je optimalen volumen vzorca 6,2 mL. To pa je prevelik volumen vzorca, da bi lahko afinitetno izloèanje avtoprotiteles z [beta]2-GPI, uporabljali kot za dokazovanje avtoprotiteles pri avtoimunskih boleznih, oziroma za njihovo odkrivanje. Dokazali smo obstoj visoko afinitetnih anti-[beta]2-GPI protiteles, ki v literaturi se niso bila opisana. Kot optimalen pufer za izpiranje protitelesse je izkazal glicin s 4 M natrijevim kloridom in pH 2,5, ki je ustrezen kompromis med pogoji za izpiranje visoko afinitetnih protiteles in zasèito kolone z vezanim [beta]2-GPI.
Type of material - undergraduate thesis
Publication and manufacture - Ljubljana : [Nadu B.], 2002
Knjižnica dp 0000000577 Nadu Barbara Afinitetna IN: 0006694
Knjižnica dp 577 Nadu Barbara Afinitetna IN: 0006694
available - reading room
Shelf entry
Adding material to shelf was successful.
Adding material to shelf failed.
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
