Izražanje površinskega antigena virusa hepatitisa B v kvasovki Saccharomyces cerevisiae = Expression of hepatitis B surface antigene in yeast Saccharomyces cerevisiae : diplomska naloga
Bedenik, Tina
V okviru raziskovalnega dela smo, z namenom izrazanja povrsinskega antigena virusa hepatitisa B v kvasovki Saccharomyces cerevisiae, pripravili rekombinantni plazmid YEpGAL1-HBs(S). Gen HBs(S), ki ...kodira povrsinski antigenvirusa hepatitisa B, smo z metodo verizne reakcije s polimerazo namnozili iz plazmida pRCžCMV-HBs(S) in ga s pomoèjo tehnologije rekombinantneDNA vstavili v plazmid YEpGAL1, med promotor GAL1 in terminator ADH. Z rekombinantnim plazmidom smo transformirali kvasovko Saccharomyces cerevisiae. Z namenom doloèitve nivoja izrazanja povrsinskega antigena virusa hepatitisa B smo preizkusili dve imunoloski metodič metodo èrtovnega prenosa in metodo prenosa western. Pri imunoloski metodi èrtovnega prenosa smo tekoèe vzorce neposredno nanesli na nitrocelulozno membrano, ki smo jo nato inkubirali v prisotnosti primarnih protiteles proti povrsinskemu antigenu virusa hepatitisa B in nato v prisotnosti sekundarnih protiteles, oznaèenih z encimom hrenove peroksidaze, ki se specifièno vezejo na primarna protitelesa. Polozaj sekundarnih protiteles smo doloèili s 4-kloro-1-naftolom. Pri imunoloski metodi prenosa western smo predhodno tekoèe vzorce denaturirali in jih nato loèili glede na velikost s poliakrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata. Za prenos loèenih proteinov iz gela nanitrocelulozno membrano smo uporabili prenos s pomoèjo elektriènega toka. Nitrocelulozno membrano smo inkubirali s protitelesi po enakem postopku kot pri imunoloski metodi èrtovnega prenosa.Pri doloèitvi nivoja izrazanja povrsinskega antigena virusa hepatitisa B smo naleteli na dve tezavi. Primarnaprotitelesa IgG so se pri imunoloski metodi èrtovnega prenosa nespecifièno vezala tako na proteinske vzorce, izolirane iz transformiranih kvasovk, kot na proteinske vzorce, izolirane iz netransformiranih kvasovk, ki bi morali sluziti kot negativna kontrola. Pri imunoloski metodi prenosa western po opravljeni poliakrilamidni gelski elektroforezi v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata in po barvanju s Coomassie Brillant Blue na gelu nibilo vidnega standarda povrsinskega antigena virusa hepatitisa B. Po inkubaciji s protitelesi in detekciji tudi nismo dobili pozitivnega signala v proteinskih vzorcih iz transformiranih kvasovk. Tudi v primeru pozitivnega signala ne bi mogli nedvoumno dokazati izrazanja povrsinskega antigena virusa hepatitisa B, saj na odtisu ni bilo standarda za primerjavo. Zaradi omenjenih tezav tako nismo mogli doloèiti nivoja izrazanja povrsinskega antigena virusa hepatitisa B v proteinskih vzorcih, izoliranih iz transformiranih kvasovk. Za uspesno doloèitev ravni izrazanja povrsinskega antigena virusa hepatitisa B bizato bilo potrebno najti ustreznejso metodo za detekcijo povrsinskega antigena virusa hepatitisa B, stabilen in ustrezno preèisèen standard povrsinskega antigena virusa hepatitisa B in stabilna specifièna primarna protitelesa.
Type of material - undergraduate thesis
Publication and manufacture - Ljubljana : [Bedenik, T.], 2005
Knjižnica dp 0000000577 Bedenik Tina Izražanje IN: 0008318
Knjižnica dp 577 Bedenik Tina Izražanje IN: 0008318
available - reading room
Shelf entry
Adding material to shelf was successful.
Adding material to shelf failed.
It was not necessary to add the material to the shelf.
Bibliographic material was successfully added on shelf.
Adding bibliographical material on shelf was not successful.
Material is already on the shelf.
Permalink
URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year
Impact factor
Edition
Category
Classification
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
JCR
SNIP
Select the library membership card:
DRS,
in which the journal is indexed
Database name
Field
Year
Links to authors' personal bibliographies
Links to information on researchers in the SICRIS system
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
