Faculty of Pharmacy, Lj. (FFALJ)
-
Priprava rdečega fluorescenčnega proteina z N-končnim imunoglobulin-vezavnim peptidom = Preparation of a red fluorescent protein with the N-terminal immunoglobulin-binding peptide : University Study Programme CosmetologyJašovič, VitaV celični in molekularni biologiji pogosto uporabljamo poročevalne proteine, s katerimi označujemo strukture v celicah ali tkivih. Gre pravzaprav za fluorokrome, pri katerih je ob osvetljevanju ... značilen pojav fluorescence, ko molekula absorbira svetlobo določene valovne dolžine in nato izseva svetlobo nižje energije, torej daljše valovne dolžine. Za označevanje celičnih struktur s poročevalnimi proteini moramo običajno v organizem vnesti njihov genski zapis. Rdeči fluorescenčni protein (RFP) v vzbujenem stanju fluorescira rdeče-oranžno, z maksimalnim vzbujanjem pri 558 nm ter emisijskim maksimumom pri 583 nm. Zaradi globljega prodiranja rdeče svetlobe skozi tkiva te fluorescenčne proteine uporabljamo pri mikroskopiji debelejših tkivnih vzorcev. V okviru diplomske naloge smo kot poročevalski protein uporabili RFP in mu na N-konec pripeli imunoglobulin-vezavni peptid min19Fc_Q6D z aminokislinskim zaporedjem GSYWYDVWF. Peptidi bi lahko postali alternativa bakterijskim imunoglobulin-vezavnim proteinom, ki jih uporabljamo kot specifične ligande protiteles (npr. pri afinitetni kromatografiji za čiščenje monoklonskih protiteles iz procesne tekočine), saj imajo le-ti številne prednosti. Z afinitetnim ligandom min19Fc_Q6D, ki izkazuje afniteto do regije Fc protiteles IgG, smo tvorili fuzijski protein min19Fc_Q6D-RFP, pri katerem smo lahko zaradi poročevalnega proteina z UV-detekcijo spremljali njegovo izražanje ter skušali vezavo na IgG vrednotiti s fluorescenčnoimunskim testom (FLISA). Gen za fuzijski protein smo pripravili z verižno reakcijo s polimerazo in ga vstavili v ekspresijski vektor. Rekombinantni protein smo uspešno izrazili v bakteriji Escherichia coli NiCo21. V nadaljevanju smo ga s pomočjo kovinsko-kelatne afinitetne kromatografije ter nadaljnjega razsoljevanja z gelsko izključitveno kromatografijo ustrezno očistili, izolirali ter ga pripravili za vrednotenje vezave na regijo Fc protiteles IgG. Interakcije s protitelesi nismo uspeli potrditi. Možne razlage za to so: i) RFP sterično ovira interakcijo med peptidom min19Fc_Q6D in protitelesi, ii) interakcija termodinamsko ni ugodna zaradi znižanja entropije, do katere bi prišlo ob vezavi, ali iii) test FLISA ni dovolj občutljiv, saj signal izhaja zgolj iz monosloja molekul na dnu vdolbinic mikrotitrske ploščice.Type of material - undergraduate thesis ; adult, seriousPublication and manufacture - Ljubljana : [V. Jašovič], 2020Language - slovenianCOBISS.SI-ID - 27494403
Author
Jašovič, Vita
Other authors
Bratkovič, Tomaž, farmacevt |
Kruljec, Nika
Topics
Imunoglobulini |
Molekularna biologija |
Celična biologija |
Peptidi |
rdeči fluorescenčni protein |
fuzijski protein |
min19Fc_Q6D |
protitelesa
![loading ... loading ...](themes/default/img/ajax-loading.gif)
Call number – location, accession no. ... |
Copy status | Reservation |
---|---|---|
Knjižnica UNK 577.2 JAŠOVIČ VITA Priprava 0000000205 IN: 0016680 Knjižnica UNK 577.2 JAŠOVIČ VITA Priprava 205 IN: 0016680 |
available - reading room
|
![loading ... loading ...](themes/default/img/ajax-loading.gif)
![loading ... loading ...](themes/default/img/ajax-loading.gif)
![loading ... loading ...](themes/default/img/ajax-loading.gif)
Shelf entry
Permalink
- URL:
Impact factor
Access to the JCR database is permitted only to users from Slovenia. Your current IP address is not on the list of IP addresses with access permission, and authentication with the relevant AAI accout is required.
Year | Impact factor | Edition | Category | Classification | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP |
Select the library membership card:
If the library membership card is not in the list,
add a new one.
DRS, in which the journal is indexed
Database name | Field | Year |
---|
Links to authors' personal bibliographies | Links to information on researchers in the SICRIS system |
---|---|
Jašovič, Vita | ![]() |
Bratkovič, Tomaž, farmacevt | 23598 |
Kruljec, Nika | 37497 |
Source: Personal bibliographies
and: SICRIS
Select pickup location:
Material pickup by post
Delivery address:
Address is missing from the member's data.
The address retrieval service is currently unavailable, please try again.
By clicking the "OK" button, you will confirm the pickup location selected above and complete the reservation process.
By clicking the "OK" button, you will confirm the above pickup location and delivery address, and complete the reservation process.
By clicking the "OK" button, you will confirm the address selected above and complete the reservation process.
Notification
Automatic login and reservation service currently not available. You can reserve the material on the Biblos portal or try again here later.
Subject headings in COBISS General List of Subject Headings
Select pickup location
The material from the parent unit is free. If the material is delivered to the pickup location from another unit, the library may charge you for this service.
Pickup location | Material status | Reservation |
---|
Reservation in progress
Please wait a moment.
Reservation was successful.
Reservation failed.
Reservation...
Membership card:
Pickup location: