U radu je pročišćena i okarakterizirana α-amilaza, izolirana iz novootkrivenog soja bakterije Anoxybacillus sp. AH1, stabilna pri visokim temperaturama u prisutnosti detergenata. Najveća količina ...enzima (1874,8 U/mL) proizvedena je nakon 24 sata inkubacije. Nakon pročišćavanja amilaze gel-filtracijskom kromatografijom u koloni punjenoj gelom Sephadex G-75, specifična se aktivnost enzima povećala 18 puta, a prinos je bio 9 %. Metodom SDS-PAGE određena je molekularna masa pročišćenog enzima od 85 kDa. Optimalna je pH-vrijednost bila 7,0; a optimalna temperatura 60 °C. Enzim je bio izuzetno stabilan u prisutnosti 30 %-tnog glicerola, te je zadržao 85 % aktivnosti na 60 °C tijekom 120 min. Pomoću Lineweaver-Burkovog dijagrama utvrđeno je da je vrijednost Km amilaze bila 0,102 μmol, a vmax 0,929 μmol/min. Aktivnost se enzima povećala u prisutnosti različitih detergenata, dok se u prisutnosti uree znatno smanjila. Ioni magnezija i kalcija bitno su povećali, a ioni cinka i bakra, te kelatori metalnih iona EDTA i 1,10-fenantrolin smanjili aktivnost α-amilaze. Aktivnost se α-amilaze znatno povećala i u prisutnosti β-merkaptoetanola i ditiotreitola, no smanjila dodatkom p-kloromerkuribenzojeve kiseline. Jodoacetamid i N-etilmaleimid imali su blag, a fenilmetilsulfonil fluorid jak inhibicijski učinak na aktivnost amilaze.
Bilateralni deficit (BLD) fenomen je koji dovodi do smanjenja motoričkog izlaza ekstremiteta prilikom izvedbe bilateralnog motoričkog zadatka u odnosu na motorički izlaz pri izvedbi zadatka ...unilateralno. Ne postoji jasno utvrđen mehanizam koji se nalazi u pozadini ovog fenomena, posebice u vertikalnim skokovima (VS). Dva mehanizma koja se spominju u VS-u jesu živčana inhibicija u bilateralnim kontrakcijama i promjena u odnosu sila-brzina ekstenzora nogu. Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi je li bilateralni deficit (BLD) jakosti i snage u VS-u primarno posljedica: (1) živčane inhibicije u bilateralnim kontrakcijama ili (2) promjene u odnosu sila-brzina ekstenzora nogu. Rezultati ukazuju na postojanje BLD-a jakosti i snage. Prilikom izvedbe VS-a s vlastitom tjelesnom masom, BLD kod mehaničkog izlaza relativne prosječne sile iznosio je 37 %, dok je veličina BLD-a relativne prosječne snage iznosila 10 %. Kod relativnog obavljenog rada zabilježen je BLD od gotovo 31 %. Glavni nalaz pokazuje značajan utjecaj rasterećenja na veličinu BLD-a kod relativne prosječne sile. Također je utvrđen značajan utjecaj rasterećenja na mehanički izlaz sile i snage, kao i na obavljeni rad. Rezultati EMG aktivnosti mišića ukazuju na simultano opadanje mehaničkog izlaza sile i EMG aktivnosti mišića. Osim utvrđenog bilateralnog EMG deficita, u nekim mišićima utvrđena je i bilateralna EMG facilitacija. Ovo je istraživanje ukazalo na neuromehaničko izvorište fenomena BLD-a jakosti pri izvedbi prirodnih balističkih pokreta kao što je VS te je unaprijedilo razumijevanje živčano-mišićne funkcije čovjeka. S obzirom na dobivene rezultate utvrđen je naglašeni utjecaj karakteristika odnosa sila-brzina na fenomen BLD-a jakosti. Time je potvrđeno kako je u prirodnim VS-ovima važan mehanizam u pozadini BLD-a jakosti promjena odnosa sila-brzina u unilateralnim naspram bilateralnih skokova. To međutim ne znači da živčana inhibicija nije mehanizam u pozadini BLD-a jakosti. Bilateralni EMG deficit, a negdje i bilateralna EMG facilitacija zabilježena kod VS-a ukazuje da živčani čimbenici zasigurno utječu na BLD kod mehaničkog izlaza sile u VS-u. Sveukupno gledajući, dobiveni rezultati ukazuju na utjecaj biomehaničkih i živčanih faktora na nastanak fenomena BLD-a jakosti i snage u vertikalnim skokovima.
Bilateralni deficit (BLD) fenomen je koji dovodi do smanjenja motoričkog izlaza ekstremiteta prilikom izvedbe bilateralnog motoričkog zadatka u odnosu na motorički izlaz pri izvedbi zadatka unilateralno. Ne postoji jasno utvrđen mehanizam koji se nalazi u pozadini ovog fenomena, posebice u vertikalnim skokovima (VS). Dva mehanizma koja se spominju u VS-u jesu živčana inhibicija u bilateralnim kontrakcijama i promjena u odnosu sila-brzina ekstenzora nogu. Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi je li bilateralni deficit (BLD) jakosti i snage u VS-u primarno posljedica: (1) živčane inhibicije u bilateralnim kontrakcijama ili (2) promjene u odnosu sila-brzina ekstenzora nogu. Rezultati ukazuju na postojanje BLD-a jakosti i snage. Prilikom izvedbe VS-a s vlastitom tjelesnom masom, BLD kod mehaničkog izlaza relativne prosječne sile iznosio je 37 %, dok je veličina BLD-a relativne prosječne snage iznosila 10 %. Kod relativnog obavljenog rada zabilježen je BLD od gotovo 31 %. Glavni nalaz pokazuje značajan utjecaj rasterećenja na veličinu BLD-a kod relativne prosječne sile. Također je utvrđen značajan utjecaj rasterećenja na mehanički izlaz sile i snage, kao i na obavljeni rad. Rezultati EMG aktivnosti mišića ukazuju na simultano opadanje mehaničkog izlaza sile i EMG aktivnosti mišića. Osim utvrđenog bilateralnog EMG deficita, u nekim mišićima utvrđena je i bilateralna EMG facilitacija. Ovo je istraživanje ukazalo na neuromehaničko izvorište fenomena BLD-a jakosti pri izvedbi prirodnih balističkih pokreta kao što je VS te je unaprijedilo razumijevanje živčano-mišićne funkcije čovjeka. S obzirom na dobivene rezultate utvrđen je naglašeni utjecaj karakteristika odnosa sila-brzina na fenomen BLD-a jakosti. Time je potvrđeno kako je u prirodnim VS-ovima važan mehanizam u pozadini BLD-a jakosti promjena odnosa sila-brzina u unilateralnim naspram bilateralnih skokova. To međutim ne znači da živčana inhibicija nije mehanizam u pozadini BLD-a jakosti. Bilateralni EMG deficit, a negdje i bilateralna EMG facilitacija zabilježena kod VS-a ukazuje da živčani čimbenici zasigurno utječu na BLD kod mehaničkog izlaza sile u VS-u. Sveukupno gledajući, dobiveni rezultati ukazuju na utjecaj biomehaničkih i živčanih faktora na nastanak fenomena BLD-a jakosti i snage u vertikalnim skokovima.
Bilateral deficit (BLD) is a phenomenon that leads to decrease of motor output from one limb in motor task that is performed bilaterally when compared with motor output from the same limb in motor task that is performed unilaterally. There is no clearly defined mechanism that lies behind this phenomenon. Previous research suggested two mechanisms in vertical jumping (VJ); neural inhibition in bilateral contractions and change of force-velocity relationship in leg extensor muscles. The purpose of this research was to determine whether the reason of BLD in force during VJ is neural inhibition in bilateral contractions or a change in force-velocity relationship in leg extensor muscles. Results are indicating occurrence of BLD in mechanical output of relative average force and power, but also in the relative work. In the performance od VJ with subject’s own body mass BLD in relative average force was 37%, while the size of BLD in power was 10%. BLD in work was 31%. Main findings show significant impact of unloading on the size of BLD in relative average force. There was also a significant influence of unloading on mechanical output of force, power and work. Results of EMG activity showed simultaneous decreas of muscle activity and mechanical force output. While bilateral EMG deficit was found in the most of muscles, there was also a bilateral EMG facilitation found in some muscles. This research has indicated neuro-mechanical source of bilateral force deficit phenomenon in ballistic motor task like VJ, and it has improved our understanding of human neuromuscular function. Regarding the results of this research, there has been found a significant influence of the force-velocity properties of the muscles on the occurrence of BLD phenomenon in mechanical force output. It has been also confirmed that in the natural tasks like VJ a significant mechanism behind aforementioned phenomenon is change in forcevelocity relationship between unilateral and bilateral performance of VJ. This conclusion does not discard influence of neural factors in the occurrence of investigated phenomenon. Bilateral EMG deficit and in some cases, bilateral EMG facilitation in VJ performance clearly shows the effect of neural factors on BLD in mechanical output of force. Altogether, the given results show two segmental BLD and divided role of biomechanical and neural factors behind the occurrence of bilateral force deficit.
Aim: To determine if inhibitors in blood and respiratory specimens
influence the polymerase chain reaction (PCR) results for Streptococcus
pneumoniae in patients with community-acquired pneumonia ...(CAP).
Patients and methods: The study included 80 patients with CAP. In
addition to conventional microbiological methods, PCR for fragment of
pneumolysin gene in serum (N=77) and BAL (N=19) specimens was also
performed. The presence of PCR inhibitors in specimens was determined
with spiking and inhibitors were removed by diluting the specimens.
Results: With all methods, S. pneumoniae was detected in 25 (31,3 %) of
patients with CAP. PCR results in 77 serum specimens were negative. PCR
inhibitors were detected in one serum specimen. BAL specimens were
PCR-positive in three patients and there were no inhibitors detected.
Discussion: When planning and performing PCR on clinical specimens, PCR
inhibitors should be considered as a possible cause of false-negative
results. Several procedures are used to remove PCR inhibitors from
clinical specimens or to diminish their influence (extraction method,
optimizing DNA amplification, diluting of specimens). Presence of
inhibitors can be determined by adding of an internal control to each
specimen or with spiking. Conclusions: In this study the presence of
inhibitors was determined in only one serum specimen. It can be
concluded that PCR inhibitors in serum and BAL specimens do not
influence the PCR results for S. pneumoniae in patients with CAP.
U ovom je radu procijenjen utjecaj glukonata, cink sulfata i eluata zelene gline na inhibiciju korozije ugljičnog čelika (EN S235 JRG) u 0,5 % i 3,5 % otopini natrij klorida pomoću metode Tafelove ...polarizacije. Primjenom umjerenih koncentracija natrij glukonata postignuta je značajna inhibicija opće korozije. U tom je slučaju inhibicija uglavnom ostvarena anodnim mehanizmom inhibicije opće korozije, uz pojavu lokalne "pitting" korozije ugljičnog čelika. Međutim, u slučaju kada je natrij glukonat pomiješan s cinkovim sulfatom i/ili eluatom zelene gline u odgovarajućim koncentracijama, dolazi do smanjenja i opće i lokalne korozije što ukazuje na dobro sinergijsko djelovanje između uporabljenih inhibitora.
Korištenjem računalnih metoda molekulskog modeliranja proučavane su konformacijske
promjene u aktivnom mjestu acetilkolinesteraze (AChE; EC 3.1.1.7) nakon vezanja raznih
liganada te su definirane ...strukturne karakteristike učinkovitih oksimskih reaktivatora AChE
inhibirane živčanim bojnim otrovima kao i smjernice za njihovu sintezu. Pripravljena su četiri
nova kiralna oksima iz skupine N-supstituiranih 2-hidroksiiminoacetamida polazeći od
racemičnog 1-fenilprop-2-en-1-amina pripravljenog iz 3-fenilprop-2-en-1-ola. Enantiomeri
oksima odijeljeni su tekućinskom kromatografijom visoke djelotvornosti na polisaharidnim
kiralnim nepokretnim fazama. Novi oksimi ispitani su kao inhibitori AChE i
butirilkolinesteraze (BChE; EC 3.1.1.8) i kao reaktivatori kolinesteraza inhibiranih tabunom,
ciklosarinom, sarinom i VX-om. Svi oksimi reverzibilno inihibiraju oba enzima s konstantom
inhibicije (KI) u mikromolarnom području. Oba enzima pokazuju najveći afinitet prema N-(3-
(4-((2-metilimidazol-1-il)metil)-1,2,3-triazol-1-il)-1-fenilpropil)-2-hidroksiiminoacetamidu
prema kojem BChE pokazuje značajnu selektivnost i stereoselektivnost. Isti oksim jedini se
pokazao učinkovitijim od vodećih oksima opisanih u literaturi i to u slučaju BChE inhibirane
ciklosarinom. Molekulskim pristajanjem utvrđeno je da na razlike u smještavanju novih
oksima u AChE i BChE najviše utječu razlike u aminokiselinama na pozicijama Tyr72,
Tyr124, Phe297 i Tyr337 u aktivnom mjestu AChE.
Using computational methods of molecular modelling conformational changes in the active
site of acetylcholinesterase (AChE; EC 3.1.1.7) upon binding of various ligands were
investigated and structural characteristics of efficient oxime reactivators of AChE inhibited
with warfare nerve agents and gudelines for their synthesis were defined. Four new chiral
oxime reactivators from N-substituted 2-hydroxiiminoacetamide group were prepared starting
from racemic 1-phenyl-allylamine prepared from cinnamyl alcohol. Enantiomers of oximes
were separated using high performance liquid chromatography on polysaharidic chiral
stationary phases. New oximes were tested for inhibition of AChE and butyrylcholinesterase
(BChE; EC 3.1.1.8) and reactivation of cholinesterases inhibited with tabun, cyclosarin, sarin
and VX. New oximes reversibly inhibit both enzymes with inhibition constant (KI) in the
micromolar range. Both enzymes showe greatest affinity toward 2-hydroxyimino-N-(3-(4-((2-
methylimidazol-1-yl)methyl)-1,2,3-triazol-1-yl)-1-phenylpropyl)acetamide towards which
BChE displays significant selectivity and stereoselectivity. Only this oxime showed greater
reactivation efficiency than the reference oximes described in literature in the case of BChE
inhibited with cyclosarin. Molecular docking studies concluded that differences in binding of
new oximes in AChE and BChE largely result from differences in the amino acids at the
position of Tyr72, Tyr124, Phe297 and Tyr337 in the AChE active site.
U ovom je radu prikazan novi način uporabe pulpe bundeve u proizvodnji kruha. Svrha je rada bila odrediti utjecaj svježe pulpe bundeve na fizička, senzorska i biološka svojstva pšeničnog kruha, a ...ispitana je i biološka dostupnost aktivnih sastojaka. Povećanjem se udjela pulpe bundeve od 5 do 20 % (izraženo kao suha tvar) smanjio volumen kruha, a povećala se tvrdoća i kohezivnost mrvica. Senzorska su svojstva kruha bila bolja pri zamjeni do 10 % brašna s pulpom bundeve. Najbolje su ocjene okusa, arome i ukupne prihvatljivosti dobili kontrolni uzorak kruha (bez pulpe bundeve), te kruh s dodatkom 5 ili 10 % pulpe. Dodatkom veće količine pulpe dobiven je kruh lošije arome i okusa. Pulpa bundeve obogaćuje kruh biološki dostupnim fenolnim spojevima (ponajprije flavonoidima), a naročito peptidima. Najveća je antioksidativna aktivnost izmjerena u uzorcima s 10 i 15 % pulpe bundeve. Dodatak pulpe znatno je povećao udjel bioraspoloživih inhibitora angiotenzin konvertirajućeg enzima (engl. ACE). Najveća je aktivnost izmjerena u kruhu s 15 i 20 % pulpe bundeve. Biološka je dostupnost ACE inhibitora u ispitanom kruhu bila vrlo velika in vitro. Pulpa je bundeve bogat izvor aktivnih sastojaka, a njezinim dodavanjem izravno u brašno postignuti su dobri rezultati pečenja i smanjeni troškovi proizvodnje. Osim toga, pulpa bundeve često zaostaje kao otpad pri proizvodnji koštica, pa se njezinim iskorištenjem povećava i ekološka te ekonomska dobit.
Pretpostavlja se da su aktivnost i stabilnost enzima veći u membranskom reaktoru koji se upotrebljava za poboljšanje arome vina nego kad je enzim prisutan u slobodnom obliku, jer
je u kontaktu samo ...sa sastojcima vina koji imaju malu molekularnu masu. Da bi se ta pretpostavka dokazala, izmjerena je stabilnost i aktivnost dvaju komercijalnih β-glukozidaza u vinu Tannat i njegovoj frakciji male molekularne mase (<10 kDa), dobivenoj ultrafiltracijom. Relativna je aktivnost β-glukozidaza Endozym Rouge i Endozym β-split bila veća u frakciji (3,8 odnosno 7,6 %), nego u izvornom uzorku vina (0,9 odnosno 5,6 %). Oba su enzima bila stabilnija u frakciji vina. Nakon 14 dana β-glukozidaza Endozym β-split zadržala je otprilike 75 % početne aktivnosti u frakciji male molekularne mase, u usporedbi s uzorkom vina, u kojem je aktivnost bila samo 37,5 %. U šaržnom je membranskom reaktoru ispitana sposobnost enzima Endozym Rouge da hidrolizira sintetski supstrat pnitrofenilglukozid, a brzina je hidrolize bila usporediva s onom dobivenom aktivnošću slobodne β-glukozidaze. Enzim Endozym β-split primijenjen je za hidrolizu sintetskog supstrata u reaktoru sa šupljim vlaknima, te je postignuta konverzija supstrata od gotovo 58
%.
U ovom radu istra.ene su metode priprave i svojstva dvije vrste biolo.ki aktivnih heterocikla iz grupe malih molekula: 1) N-sulfonilpurina (potencijalnih antitumorskih lijekova i inhibitora enzima ...purin nukleozid fosforilaze) i 2) peptidnih derivata fenantridina (potencijalnih antitumorskih lijekova i fluorescentnih senzora). Pripravljena je serija C6, N9 supstituiranih purina sa sulfonamidnim farmakoforima. Najprije je sintetizirana serija 6-klorpurinskih derivata uvo.enjem sulfonilnog supstituenta u polo.aj N9 purinske baze. Potom su, supstitucijom klora u C6 polo.aju, sintetizirani 6-morfolino- i 6-bis(2- hidroksietil)amino-derivati N-9-sulfonilpurina. Biolo.ka aktivnost 6-morfolino- i 6-bis(2-hidroksietil)amino-derivata purina ispitana je MTT testom na stani.nim linijama leukemije i limfoma (Raji, HuT 78, K-562), karcinoma (CaCo-2, HeLa) i na normalnoj stani.noj liniji (MDCK I). Najja.i citotoksi.ni u.inak pokazao je 6- morfolino-derivat 17 s trans-Ŕ-stirensulfonilnim supstituentom u N9 polo.aju purina na svim ispitanim stani.nim linijama. 6-morfolinski derivati s tosilnim, naftilsulfonilnim i bifenilsulfonilnim supstituentom u N9 polo.aju purina (8, 9 i 10) pokazali su srednje jako antiproliferativno djelovanje na Raji i HuT 78 stani.ne linije, a spojevi 9 i 10 pokazali su i srednje jako djelovanje na stanice K-562. Ispitana je i sposobnost inhibicije PNP enzima izoliranog iz dva soja bakterije Helicobacter pylori te PNP enzima iz bakterije Escherichia coli. Najbolji rezultati dobiveni su s 6-morfolinoderivatima 8 i 18. Peptidni derivati fenantridina pripravljeni su klasi.nim metodama peptidne kemije (sinteza u otopini). Negishijevom reakcijom pripravljen je alaninski derivat fenantridina 22 koji je funkcionaliziran peptidnom okosnicom nadogra.enom preko N-terminalnog kraja. Pripravljeni su di-, tri- i tetrapeptidni derivati s fenantridinom u bo.nom lancu, koji sadr.e gvanidinopirolnu, gvanidinsku (arginin), pirensku ili fluorensku strukturnu jedinicu. Gvanidinopirolni i argininski derivati prevedeni su u hidrokloridne soli. Ispitane su interakcije odabranih spojeva (gvanidinopirolni derivati 28b i 29b) s polinukleotidima pomo.u spektrofotometrijskih (UV/Vis, CD, fluorimetrija) metoda. Spojevi su, ovisno o konformaciji u kojoj se nalaze, pokazali razli.iti tip interakcija. Spoj 28b, .iji vii kromofori nisu u intramolekulskoj interakciji u blago kiselom mediju, najvjerojatnije se ve.e u mali utor DNA i veliki utor RNA. Spoj 29b, .iji kromofori su u intramolekulskoj .-. interakciji, ve.e se uz okosnicu polinukleotida. U neutralnom mediju oba spoja aglomeriraju uz fosfatnu okosnicu.
The thesis presents preparation and characteristics of two types of biologically active heterocyclic small molecules: 1) N-sulfonylpurines (potential antitumor agents and inhibitors of the purine nucleoside phosphorylase enzyme, and 2) peptide phenanthridine derivatives (potential antitumor agents and fluorescent probes). Series of C6, N9 substituted purines bearing sulfonamide pharmacophore has been prepared. Series of 6-chloropurine derivatives has been prepared by introduction of sulfonyl substituent at the N9 position of the purine base. Substitution of chlorine at the C6 position yielded 6- morpholino- and 6-bis(2-hydroxyethyl)amino-derivatives of N-9-sulfonylpurine. Biological activities 6-morpholino- and 6-bis(2-hydroxyethyl)aminopurine derivatives have been tested by MTT test on the leukemia and lymphoma (Raji, HuT 78, K-562), carcinoma (CaCo-2, HeLa) and normal (MDCK 1) cell line. Compound 17, bearing trans--styrenesulfonyl substituent at N9 position of the purine base produced the strongest cyctotoxic effect on all of the tested cell lines. 6-morpholino-derivatives with tosyl, naphtylsulfonyl and biphenylsulphonyl substituent at the N9 position of the purine (8, 9 and 10) exhibited moderate antiproliferative effect on the Raji and HuT 78 cell lines, while 9 and 10 exhibted moderate antiproliferative effect on the K-562 cell line too. The inhibition of the PNP enzyme isolated from two strains of Helicobacter pylori and PNP from Escherichia coli was also tested. Best results are obtained with 6-morpholino-derivatives 8 and 18. Peptide phenanthridine derivatives were prepared by classic peptide chemistry methods (synthesis in solution). Alanine derivative of phenanthridine 22 was prepared by Negishi reaction, and subsequently functionalized by peptide backbone constructed starting from the Nterminus of 22. Di-, tri- and tetrapeptide phenanthridine derivatives with guanidinopyrrole, guanidine (arginine), pyrene or fluorene moiety have been prepared as well. Finally, guanidinopyrrole and arginine derivatives have been converted into hydrochloride salts. ix Interactions of chosen compounds (guanidinopyrrole derivatives 28b and 29b) with polynucleotides have been studied via several spectrophotometric methods, namely UV/visible, circular dichroism and fluorescence spectroscopies. The compounds have shown different types of interactions, depending on their conformation. Compound 28b, whose chromophores are not interacting mutually in mildly acidic media, most likely binds to minor groove of DNA and major groove of RNA. Compound 29b, whose chromophores are involved in intramolecular - interaction, binds on the phosphate backbone of the polynucleotide. In neutral media both compounds agglomerate along the phosphate backbone.
Sažetak Cilj ovog rada bio je istražiti mikrobiološke promjene u trajnim kobasicama od konjskog mesa prema fazama zrenja i sezoni proizvodnje, determinirati bakterije mliječne kiseline i ispitati ...njihov inhibicijski potencijal prema bakteriji Listeria monocytogenes. Sezona proizvodnje značajno je utjecala na ukupni broj bakterija, broj bakterija mliječne kiseline, koagulaza negativnih koka, enterokoka i kvasaca u gotovom proizvodu (p<0,05). Bakterije mliječne kiseline bile su najbrojnija mikrobna populacija u nadjevu, uz značajan broj kvasaca i koagulaza negativnih koka. Najčešće izolirana vrsta bakterija mliječne kiseline bila je Lactobacillus plantarum (56 %), a potom Weisella confusa (26 %), Lactobacillus fermentum (6 %), Lactobacillus pentosus (6 %), Lactococcus lactis subsp. lactis (2 %), Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii (2 %) i Weisella viridescens (2 %). Najsnažnije inhibicijsko djelovanje prema L. monocytogenes in vitro pokazali su izolati laktobacila. Dobiveni rezultati mogu poslužiti boljem razumijevanju specifičnosti fermentacije kobasica od konjskog mesa u odnosu na druge vrste mesa te poslužiti u postupku standardizacije proizvodnje.
Za izdvajanje bioaktivnih peptida iz kompas meduze (Chrysaora sp.) izoliran je kolagen, te je hidroliziran s pomoću tri proteaze: tripsina, alkalaze i komercijalnog prozivoda Protamex. Izmjeren je i ...uspoređen učinak različito inhibiranih peptida na inhibiciju angiotenzin konvertirajućeg enzima (ACE), te je pomoću metoda FRAP i DPPH ispitana njihova antioksidativna aktivnost. Osim toga, ispitan je utjecaj trajanja hidrolize na bioaktivnost peptida, tj. na inhibiciju ACE i antioksidativnu aktivnost. Najveća je ukupna antioksidacijska aktivnost (FRAP) izmjerena u hidrolizatima dobivenim pomoću komercijalne proteaze Protamex (25-27 mM) nakon 7 sati hidrolize, te nakon 9 sati hidrolize pomoću tripsina (24-26 mM). Nasuprot tome, hidrolizati dobiveni pomoću tripsina imali su najveću sposobnost uklanjanja DPPH radikala (94 % nakon 1 sata i 92 % nakon 3 sata). Hidrolizati dobiveni pomoću tripsina imali su najbolju sposobnost inhibicije ACE (89 % nakon 3 sata). Pomoću dvojne masene spektrometrije određene su sekvencije peptida koje su imale najveću aktivnost, a rezultati pokazuju da su hidrolizati imali veći udjel hidrofobnih aminokiselina i jedinstvenih sekvencija aminokiselina, što vjerojatno pridonosi njihovoj biološkoj aktivnosti.
PDF
