Fakulteta za farmacijo, Ljubljana (FFALJ)
-
Optimizacija izražanja in čiščenja rekombinantne glikoziltransferaze O-β-N-acetilglukozamin transferaze = Expression and purification optimization of recombinant O-linked β-N-acetylglucosamine transferase : enoviti magistrski študij farmacije : Uniform Master's Pharmacy ProgramPavšič, SelenaProtein O GlcNAc transferaza OGT je edini encim, ki katalizira pripenjanje beta N acetilglukozamina na hidroksilno skupino aminokislinskih ostankov serina in treonina znotrajceličnih proteinov. N ... acetilglukozaminilacija je obsežna dinamična posttranslacijska modifikacija, ki se močno prepleta s signalnimi potmi fosforilacije proteinov. Modificirani proteini so vključeni v mnoge celične procese, motnje v njihovi homeostazi pa so povezane s številnimi kroničnimi boleznimi. Zaradi biološkega pomena OGT predstavljajo zaviralci ključno orodje za razumevanje mehanizmov modifikacije, odkrivanje njenih neznanih vlog ter validiranje OGT kot terapevtske tarče. Učinkovita proizvodnja funkcionalnih proteinov v heterolognih gostiteljskih sistemih je eden izmed glavnih temeljev sodobne biotehnologije. V magistrski nalogi smo se posvetili optimizaciji izražanja in čiščenja rekombinantnega proteina OGT. Namen naloge je bil pridobiti aktiven in kromatografsko čist protein ustrezne koncentracije z uporabo ekspresijskega sistema E. coli. V prvem delu naloge smo protein testno izražali pri različnih koncentracijah induktorja v treh bakterijskih sevih NiCo21DE3, Rosetta gami2DE3pLysS in SHuffle T7 Express lysY. Za izboljšanje izražanja smo ekspresijska sistema NiCo21DE3 ter SHuffle T7 Express lysY transformirali s plazmidom pRARE2, ki vsebuje sedem tRNA za prepoznavo redkih kodonov. Analiza celičnih lizatov s poliakrilamidno gelsko elektroforezo v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata je pokazala, da ima OGT najvišjo stopnjo izražanja v bakterijskem sevu NiCo21DE3 z vstavljenim pRARE2 pri koncentraciji induktorja 0,2 mM. Drugi del magistrske naloge zajema večstopenjsko čiščenje proteina, pridobljenega z izražanjem v povečanem obsegu. Preskušali smo vplive načina celične lize na ustrezno strukturo proteina, način odstranjevanja nativnih proteinov E. coli ter tehnike koncentriranja proteina za dosego želene količine in čistote. Za najuspešnejše se je izkazala liza bakterijskih celic s soniciranjem, kombinacija izolacije in čiščenja s kovinsko kelatno kromatografijo in gelsko filtracijo ter končno koncentriranje z ultrafiltracijo. V vse pufre smo dodali 0,1 odstotek Tweena 20. Doseženo ustrezno koncentracijo smo potrdili spektrofotometrično, čistoto z vizualizacijo lise pravilne velikosti na poliakrilamidnem gelu, aktivnost pa s kvantitativnim encimskim testom na osnovi fluorescence.Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasleZaložništvo in izdelava - Ljubljana : [S. Pavšič], 2021Jezik - slovenskiCOBISS.SI-ID - 75459587
Avtor
Pavšič, Selena
Drugi avtorji
Bratkovič, Tomaž, farmacevt, 1978-
Teme
Analizna kemija |
OGT |
O-GlcNAc-transferaza |
redki kodoni |
optimizacija |
izražanje |
čiščenje
Signatura – lokacija, inventarna št. ... |
Status izvoda | Rezervacija |
---|---|---|
Knjižnica emšf 0000000543 PAVŠIČ SELENA Optimizacija 0000000987 IN: 0017025 Knjižnica emšf 543 PAVŠIČ SELENA Optimizacija 987 IN: 0017025 |
prosto - za čitalnico
|
Vnos na polico
Trajna povezava
- URL:
Faktor vpliva
Dostop do baze podatkov JCR je dovoljen samo uporabnikom iz Slovenije. Vaš trenutni IP-naslov ni na seznamu dovoljenih za dostop, zato je potrebna avtentikacija z ustreznim računom AAI.
Leto | Faktor vpliva | Izdaja | Kategorija | Razvrstitev | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP | JCR | SNIP |
Baze podatkov, v katerih je revija indeksirana
Ime baze podatkov | Področje | Leto |
---|
Povezave do osebnih bibliografij avtorjev | Povezave do podatkov o raziskovalcih v sistemu SICRIS |
---|---|
Pavšič, Selena | 55893 |
Bratkovič, Tomaž, farmacevt, 1978- | 23598 |
Vir: Osebne bibliografije
in: SICRIS
Izberite prevzemno mesto:
Prevzem gradiva po pošti
Naslov za dostavo:
Med podatki člana manjka naslov.
Storitev za pridobivanje naslova trenutno ni dostopna, prosimo, poskusite še enkrat.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrano prevzemno mesto in naslov za dostavo ter dokončali postopek rezervacije.
S klikom na gumb "V redu" boste potrdili zgoraj izbrani naslov za dostavo in dokončali postopek rezervacije.
Obvestilo
Trenutno je storitev za avtomatsko prijavo in rezervacijo nedostopna. Gradivo lahko rezervirate sami na portalu Biblos ali ponovno poskusite tukaj kasneje.
Gesla v Splošnem geslovniku COBISS
Izbira mesta prevzema
Gradivo iz matične enote je brezplačno. Če je gradivo na mesto prevzema dostavljeno iz drugih enot, lahko knjižnica to storitev zaračuna.
Mesto prevzema | Status gradiva | Rezervacija |
---|
Rezervacija v teku
Prosimo, počakajte trenutek.
Rezervacija je uspela.
Rezervacija ni uspela.
Rezervacija...
Članska izkaznica:
Mesto prevzema: