UP - logo
(UL)
  • Predstavitev ektodomene eritropoetinskega receptorja na nitastem bakteriofagu za detekcijo mimetikov eritropoetina = Filamentous bacteriophage display of the erythropoietin receptor ectodomain for detection of erythropoietin mimetics ; enoviti magistrski študij farmacije
    Cetin, Sandra
    Eritropoetin je protein, ki spodbuja eritropoezo in tako povečuje oksiformno kapaciteto krvi. Slednja korelira s fizično vzdržljivostjo, zaradi česar nekateri športniki posegajo po različnih ... rekombinantnih eritropoetinih, kljub prepovedi s strani Svetovne antidopinške organizacije. Najbolj problematična je uporaba t.i. mimetikov eritropoetina - snovi, ki se, strukturno gledano, bistveno razlikujejo od eritropoetina, imajo pa eritropoetinu podoben fizološki učinek. Obstoječe analizne metode namreč niso sposobne dokazovanja prisotnosti le teh v bioloških vzorcih športnikov, saj temeljijo na dokazovanju snovi znane strukture ali na posredni potrditvi dopinga preko dolgotrajnega spremljanja določenih parametrov v krvi ali urinu. Namen magistrske naloge je priprava in vrednotenje univerzalne testne platforme za detekcijo mimetikov eritropoetina v bioloških vzorcih športnikov, ne glede na njihovo strukturo. Testna platforma temelji na bakteriofagih M13, ki na svoji površini predstavljajo ektodomeno eritropoetinskega receptorja (EpoR). Fage v testni platformi uporabljamo kot alternativo primarnim protitelesom v dveh ločenih encimskoimunskih testih (ELISA). ELISA1 z imobiliziranimi ligandi za EpoR omogoča detekcijo fagov z nezasedenimi EpoR, ELISA2 z imobiliziranimi protitelesi anti-c-myc pa odraža delež fagov z zasedenimi EpoR. Razmerje signalov ELISA1/ELISA2 nakazuje na prisotnost oz. odsotnost mimetikov eritropoetina, pri čemer višje vrednosti nakazujejo na vzorec brez mimetikov, nižje pa na prisotnost mimetikov. Fage smo pripravili tako, da smo genski konstrukt za eritropoetinski receptor vstavili v fagmidni vektor in ga nato vstavili v kompetentne celice ter izvedli superinfekcijo s pomožnim fagom. Po izolaciji rekombinantnih fagov M13-EpoR smo funkcionalnost predstavljenega receptorja potrdili s testom ELISA. V nadaljevanju smo določili optimalne koncentracije fagov, ligandov za eritropoetinski receptor ter protiteles za uporabo v testni platformi. Pri preskušanju testne platforme z uporabo umetnega matriksa, ki oponaša biološke vzorce, smo ugotovili, da test ELISA1 zanesljivo loči neoporečen vzorec (brez mimetikov) od sumljivega vzorca (z mimetikom). Kljub temu celotna platforma ni dala željenih rezultatov, saj so odzivi pri testu ELISA2 bili visoki, ne glede na prisotnost mimetikov eritropoetina. Na podlagi rezultatov preskušanja odstranitve fagov s paramagnetnimi kroglicami smo sklepali, da znaten delež fagov predstavlja okrnjen fuzijski protein na svoji površini, in sicer myc-tag brez EpoR, zaradi česar se fagi vežejo na protitelesa anti-c-myc v testu ELISA2, kljub temu da nimajo EpoR. Za izboljšanje testa ELISA2 predlagamo prestavljanje myc-tag-a na skrajni N-konec izraženega EpoR.
    Vrsta gradiva - magistrsko delo ; neleposlovje za odrasle
    Založništvo in izdelava - Ljubljana : [S. Cetin], 2019
    Jezik - slovenski
    COBISS.SI-ID - 4764273

Knjižnica Signatura – lokacija, inventarna št. ... Status izvoda
Fakulteta za farmacijo, Ljubljana Knjižnica
emšf 61 CETIN SANDRA Predstavitev 734
IN: 0016248
prosto - za čitalnico
loading ...
loading ...
loading ...